Η ποικιλία των βακτηριακών λοιμώξεων απαιτεί σαφή αναγνώριση του παθογόνου και τον ορισμό του είδους του. Για τον προσδιορισμό του τύπου του μικροοργανισμού, οι μικροβιολόγοι βοηθούνται από τις χρωστικές του ιδιότητες - την ευαισθησία του μικροβίου στη χρώση με διάφορες βαφές. Αυτή η μέθοδος σας επιτρέπει να εξερευνήσετε τη μορφολογία του παθογόνου. Οι χρωστικές ιδιότητες των βακτηρίων έχουν μεγάλη σημασία για πρακτική και θεωρητική έρευνα στον τομέα της μικροβιολογίας.
Μικροβιακή έρευνα
Στη βακτηριολογία, υπάρχουν πολλές μέθοδοι για τη χρώση μικροοργανισμών. Όλα βασίζονται στις βλαστικές ιδιότητες των βακτηρίων. Η χρώση σάς επιτρέπει να προσδιορίσετε το σχήμα, τη δομή, το μέγεθος, τη σχετική θέση τους. Αυτό επιτρέπει την επίλυση των προβλημάτων συστηματοποίησης των τύπων μικροοργανισμών της γενικής βιολογίας και της συγκριτικής μικροβιολογίας.
Γιατί να τα βάψετε
Τα βακτήρια είναι πρακτικάδιαφανείς οργανισμοί, και χωρίς τη χρήση χρώσης, είναι ελάχιστα ορατοί για τη συμβατική μικροσκοπία. Μπορείτε να χρησιμοποιήσετε ειδικούς τύπους μικροσκοπίας (αντίθεση φάσης, σκοτεινό πεδίο) για τη μελέτη αντικειμένων, αλλά ο ευκολότερος τρόπος είναι να χρωματίσετε, μετά από τον οποίο τα βακτήρια γίνονται ορατά σε ένα συμβατικό μικροσκόπιο φωτός.
Προετοιμασία δείγματος
Ανεξάρτητα από την τεχνική χρώσης που χρησιμοποιείται, υπάρχουν ενιαίοι κανόνες για την προετοιμασία του υπό μελέτη αντικειμένου. Τα ακόλουθα στάδια είναι υποχρεωτικά:
- Τα αποστειρωμένα εργαλεία κάνουν ένα επίχρισμα σε μια γυάλινη πλάκα.
- Το δείγμα στεγνώνει. Αυτό γίνεται σε θερμοκρασία δωματίου ή χρησιμοποιώντας ντουλάπια στεγνώματος.
- Ακολουθεί το στάδιο στερέωσης - οι μικροοργανισμοί προσκολλώνται στο γυαλί με ειδικές ενώσεις.
- Σωστή χρώση - το δείγμα καλύπτεται με βαφή για καθορισμένο χρονικό διάστημα, μετά το οποίο ξεπλένεται.
- Τελικό στέγνωμα - το δείγμα στεγνώνει ξανά.
Οι πιο κοινές βαφές
Οι πιο συχνά χρησιμοποιούμενες βαφές βασίζονται στην ανιλίνη με διαφορετικές τιμές οξέος (pH). Οι περισσότερες βαφές είναι σκόνες που είναι αραιωμένες σε οινόπνευμα.
Οι βαφές στις οποίες τα κατιόντα είναι οι χρωστικοί παράγοντες ονομάζονται βασικές (pH μεγαλύτερο από 7). Μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τη χρώση μικροοργανισμών σε κόκκινα (ματζέντα, σαφρανίνη), βιολετί (μεθυλοβιολέτα, θειονίνη), μπλε (μπλε του μεθυλενίου), πράσινο (πράσινο μαλαχίτη), καφέ (χρυσοϊδίνη) και μαύρο (ινδουλίνη).
Οι χρωστικές, στις οποίες οι χρωστικοί παράγοντες είναι ανιόντα, ονομάζονται όξινες (pH μικρότερο από 7). Θα χρωματίσουν το δείγμα κόκκινο (ηωσίνη), κίτρινο (πικρίνη) ή μαύρο (νιγκροσίνη).
Υπάρχει μια ομάδα ουδέτερων βαφών (για παράδειγμα, ροδαμίνη Β), όπου τόσο τα κατιόντα όσο και τα ανιόντα δρουν ως χρωστικοί παράγοντες.
Πολιτισμός νεκρός ή ζωντανός
Οι μέθοδοι χρώσης χωρίζονται σε δύο ομάδες ανάλογα με τη μορφή ζωής του δοκιμίου.
- Χρώση ζωτικής σημασίας (διάρκειας ζωής). Αυτή η μέθοδος μελέτης των ιδιοτήτων των μικροοργανισμών χρησιμοποιείται στη μελέτη ζωντανών ιστών, γεγονός που καθιστά δυνατή την παρατήρηση των ζωτικών διεργασιών των μικροβίων. Για αυτή τη χρώση χρησιμοποιούνται βαφές χαμηλής τοξικότητας και υψηλής διεισδυτικής ισχύος.
- Μετα-ζωτική χρώση. Αυτή είναι η χρώση νεκρών ή νεκρών μικροοργανισμών. Χάρη στις χρωματικές ιδιότητες των βακτηρίων, οι μικροβιολόγοι καθορίζουν τη δομή τους. Είναι αυτή η χρώση που χρησιμοποιείται πιο ευρέως.
Gram-θετικό και Gram-αρνητικό
Αυτά τα χαρακτηριστικά των βακτηρίων μπορούν να βρεθούν στις οδηγίες για διάφορα φάρμακα. Αυτή η μέθοδος μελέτης των χρωματικών ιδιοτήτων των βακτηρίων βασίζεται στη χρήση βαφής ιώδους γεντιανής και στερέωσης ιωδίου. Αυτή είναι η τεχνική του Hans Christian Gram, ενός Δανού γιατρού που την πρότεινε το 1884. Ως αποτέλεσμα αυτής της χρώσης, τα βακτήρια χωρίζονται σε δύο ομάδες:
- Gram (+) - γίνει μπλε(σταφυλόκοκκοι και στρεπτόκοκκοι).
- Γραμάριο (-) - λεκές από ροζ έως κόκκινο (εντεροβακτήρια, σαλμονέλα, E. coli).
Τα διαφορετικά αποτελέσματα χρώσης οφείλονται σε διαφορετικές βαφικές ιδιότητες των βακτηριακών τοιχωμάτων. Η μέθοδος χρώσης Gram εξακολουθεί να είναι η κύρια στη διάγνωση ορισμένων μολυσματικών ασθενειών.
Άλλες τεχνικές χρώσης
Ας χαρακτηρίσουμε μερικές ακόμη μεθόδους που χρησιμοποιούνται ευρέως στη βακτηριολογία.
- Μέθοδος Ziehl-Nelson - προσδιορίζει την αντίσταση στα οξέα των βακτηρίων. Προσδιορίζει τους αιτιολογικούς παράγοντες της φυματίωσης και της μυκοβακτηρίωσης.
- Τεχνική Romanovsky-Giemsa - χρωματίζει κόκκινα τα οξεόφιλα (οξικό οξύ και γαλακτικό οξύ) βακτήρια και τα βασεόφιλα (σπειροχήτες και πρωτόζωα) μπλε.
- Τεχνική του Morozov - λερώνει τα βακτήρια καφέ και κάνει τα μαστίγια τους ορατά.
μπορεί να δει τα σπόρια
Η χρώση με φουτσίνη του Tsiel σάς επιτρέπει να βλέπετε βακτηριακά σπόρια. Έχοντας ένα ροζ χρώμα μετά τη χρώση, είναι σαφώς ορατά στο φόντο των μπλε βακτηρίων. Αυτή η μέθοδος είναι επίσης εργαλείο βακτηριολογίας και έχει μεγάλη πρακτική σημασία.
