Στον διαφορικό προσδιορισμό των εντεροβακτηρίων και ορισμένων δονήσεων, η αντίδραση Voges-Proskauer κατέχει ιδιαίτερη θέση. Η δοκιμή βασίζεται στην ικανότητα των βακτηρίων να ζυμώνουν τη γλυκόζη για να σχηματίσουν ακετοΐνη.
Η ουσία της ερευνητικής διαδικασίας
Στη μικροβιολογία, η αντίδραση Voges-Proskauer χρησιμοποιείται συχνά για τη διαφοροποίηση εντός της οικογένειας των εντεροβακτηρίων Yersinia (συμπεριλαμβανομένων των παθογόνων της ψευδοφυματίωσης και της εντεροκολίτιδας), της Escherichia coli και των αερόβιων που σχηματίζουν σπόρους. Το αποτέλεσμα απεικονίζεται με χρωματισμό του μέσου όταν προστίθενται ορισμένα αντιδραστήρια.
Αυτή η δοκιμή ανήκει στη σειρά IMViC (συντομογραφία των Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate) - μια ομάδα δοκιμών αναγνώρισης που περιλαμβάνει διαφορικούς ορισμούς:
- με ινδόλη, με βάση τη διάσπαση της τρυπτοφάνης σε ινδόλη, που χρησιμοποιείται παρουσία αντιδραστηρίου Kovacs ή Ehrlich·
- χρήσηmethylroth ή ερυθρό του μεθυλίου, που ανιχνεύει ένα δεδομένο pH ως αποτέλεσμα του μεταβολισμού της γλυκόζης·
- Αντιδράσεις Voges-Proskauer για την ανίχνευση ακετυλο-μεθυλοκαρβινόλης;
- χρήση κιτρικού με αλλαγή χρώματος ως αποτέλεσμα αλκαλοποίησης του μέσου.
Η ουσία της διαδικασίας είναι η οπτικοποίηση της παρουσίας διαγνωσμένων βακτηρίων λόγω της αλληλεπίδρασης της ακετοΐνης που σχηματίζεται από αυτά με την καυστική ποτάσα παρουσία οξυγόνου. Η ακετυλο-μεθυλοκαρβινόλη οξειδώνεται σε διακετύλιο, το οποίο σχηματίζει μια έντονο κόκκινο ή ροζ ένωση. Αυξήστε την ευαισθησία της δοκιμής εισάγοντας άλφα-ναφθόλη πριν προσθέσετε καυστική ποτάσα.
Ρύθμιση δοκιμής
Η σύνθεση της αντίδρασης Voges-Proskauer περιλαμβάνει την προκαταρκτική καλλιέργεια μικροοργανισμών. Μια καθαρή καλλιέργεια σπέρνεται στο διαφορικό διαγνωστικό μέσο του Clark, μια παραλλαγή του οποίου είναι ο ζωμός του Clark (χωρίς την προσθήκη άγαρ-άγαρ). Είτε χρησιμοποιείται έτοιμο μέσο, είτε παρασκευάζεται ανεξάρτητα. Τα συστατικά περιλαμβάνουν:
- 5g πεπτόνη;
- 5g γλυκόζη;
- 5g διβασικό φωσφορικό κάλιο;
- 1L απόσταγμα.
Κατά τη διάρκεια της μελέτης, η καλλιέργεια εμβολιάζεται με στείρο βακτηριολογικό βρόχο σε υγρό μέσο. Ποσότητα - 5 ml σε δοκιμαστικό σωλήνα συν μάρτυρα. Η επώαση πραγματοποιείται σε θερμοκρασία 35-37 βαθμών για δύο ημέρες. Στη συνέχεια, μια μελέτη της αντίδρασης Voges-Proskauer πραγματοποιείται σε στάδια:
- 2, 5 ml καλλιέργειας ζωμού μεταφέρονται σε αποστειρωμένο σωληνάριο.
- Προσθέστε έξι σταγόνες άλφα-ναφθόλης (διάλυμα αλκοόλης 5%).
- Προσθήκη 40%ένα διάλυμα καυστικού καλίου σε ποσότητα 0,1 ml ή δύο σταγόνες.
- Η ανάδευση πραγματοποιείται με απαλή ανακίνηση του δοκιμαστικού σωλήνα.
- Αξιολογήστε το αποτέλεσμα μετά από 15 λεπτά από την έναρξη του πειράματος.
Μια εναλλακτική μέθοδος δοκιμής είναι η ολονύκτια επώαση, ο χρόνος της οποίας μειώνεται σε 18 ώρες ή σε μία ημέρα. Εκτός από αυτή τη μέθοδο, χρησιμοποιείται επίσης μια δοκιμή express: μια καλλιέργεια εισάγεται σε βρόχο σε 2 ml του μέσου, επωάζεται για περίπου τέσσερις ώρες, στη συνέχεια προστίθενται αντιδραστήρια σε ίση ποσότητα 2-3 σταγόνων, αναμειγνύονται και Το αποτέλεσμα αξιολογείται μετά από δέκα λεπτά.
Ο έλεγχος είναι ένας από τους αιτιολογικούς παράγοντες της πνευμονίας Klebsiella pneumoniae - στέλεχος atcc 13883.
Αξιολόγηση του αποτελέσματος
Μετά τον απαιτούμενο χρόνο μετά την προσθήκη των αντιδραστηρίων (από 5 έως 15 λεπτά), θα πρέπει να παρατηρηθεί ένα κόκκινο-κόκκινο χρώμα με έντονη θετική αντίδραση, κόκκινο και ροζ - με ασθενή θετική αντίδραση. Καμία αλλαγή δεν καταγράφεται ως αρνητικό αποτέλεσμα.
Η περίσσεια καυστικής ποτάσας σε διάλυμα μπορεί να δώσει μια απομίμηση θετικής αντίδρασης, χρώσης σε χάλκινο χρώμα. Σε αυτή την περίπτωση, η αρνητική απόκριση της εξεταζόμενης αποικίας θα πρέπει να καταγράφεται. Επίσης, χρώση χαλκού εμφανίζεται σε περιπτώσεις που η αξιολόγηση γίνεται μία ώρα μετά την εισαγωγή των αντιδραστηρίων.
Κατά την αξιολόγηση του αποτελέσματος, πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι η παρατεταμένη καλλιέργεια των μελετώμενων μικροοργανισμών (περισσότερες από τρεις ημέρες) οδηγεί σε οξίνιση του μέσου, η οποία μπορεί να οδηγήσει σε εσφαλμένο αποτέλεσμα της μελέτης. Η αντίδραση μπορεί να είναι ήπια θετική ήψευδώς αρνητικό.
Απαιτήσεις για δοκιμαστικά αντιδραστήρια
Τα αντιδραστήρια Voges-Proskauer πρέπει να πληρούν απαιτήσεις όπως η σωστή συγκέντρωση, η υψηλή καθαρότητα και η σταθερότητα, η οποία επιτυγχάνεται μέσω της κατάλληλης αποθήκευσης.
Τα έτοιμα προς χρήση κιτ δοκιμής συνήθως περιέχουν αντιδραστήρια για 100 ή περισσότερες χρήσεις και διατίθενται σε πλαστικά ή φιαλίδια από φιμέ γυαλί. Η ποιότητα ρυθμίζεται από τη σχετική τεκμηρίωση.
